| Resumo | A caprinocultura tem um importante papel sócio econômico na região Nordeste do Brasil, haja vista quase a totalidade do rebanho caprino está situado nessa região. Essa atividade contribui com a geração de renda e fonte de proteína acessível para a agricultura de subsistência. Diante da relevância dessa atividade, objetivou-se avaliar o efeito da bromelina sobre a qualidade espermática, pós-descongelação, em caprinos. Para tanto foram utilizados cinco caprinos da raça Anglo Nubiana, em idade reprodutiva e clinicamente saudáveis. A colheita do sêmen foi realizada com o auxílio de uma vagina artificial específica para pequenos ruminantes, pré-aquecida a uma temperatura de 39ºC, acoplada a um tubo coletor graduado. Após colheita o sêmen foi depositado em banho-maria à temperatura de 37ºC. Imediatamente procedeu-se as análises espermáticas. Seguidamente a análise da concentração espermática, o volume total do pool foi dividido em cinco grupos. Um pertencente ao grupo controle, que foi composto de (ACP-101/102®) e os outros quatro os grupos tratamentos com ACP-101/102® acrescidos com bromelina nas concentrações de 5%; 10%; 15% e 20%. As amostras foram criopreservadas com auxílio do aparelho Tk3000® (TK Tecnologia em Congelação LTDA, Uberaba, Brasil), seguindo-se as instruções do fabricante. Posteriormente, as palhetas foram imersas em nitrogênio líquido (-196°C) e armazenadas em botijões criogênicos. Após o período mínimo de uma semana as amostras foram descongeladas e avaliadas por meio do sistema CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). Posteriormente foram realizados testes de termo resistência, sondas fluorescente para avaliação da integridade de membrana e acrossomo, teste cometa para avaliação da integridade do DNA espermático e teste de análise ultraestrutural dos espermatozoides por meio de microscopia eletrônica de transmissão (MET). Após a descongelação, a motilidade espermática total avaliada pelo sistema CASA foi mais bem preservada no grupo controle e no grupo experimental, utilizando a concentração de 5% em comparação ao uso da maior concentração (20%). A velocidade curvilínea (VCL) e velocidade média da trajetória (VAP) dos espermatozoides foram maiores no grupo controle em comparação aos demais. Entre os grupos utilizando bromelina, menores velocidades foram verificadas nos espermatozoides do grupo utilizando 20% desde componente. Em relação a integridade do DNA as respectivas concentrações de bromelina (5%; 10%; 15% e 20%) não apresentaram diferença significativa em relação ao grupo controle, dessa forma fica visível que a bromelina não apresenta genotoxidade aos espermatozoides caprinos. A análise ultraestrutural revelou que o grupo contendo 5% de Bromelina demonstrou preservação intermediaria apresentando células bem preservadas a nível de peça intermediária e cauda e no grupo contendo 10% foi observado baixa preservação celular, demonstrando que a bromelina nessa concentração pode levar efeitos nocivos aos espermatozoides. Portanto, o uso da Bromelina adicionada ao diluidor/crioprotetor de sêmen caprino mostrou-se satisfatório nos parâmetros seminais pós descongelação. No entanto, mais estudos são necessários a fim de aperfeiçoar e validar o uso da bromelina em tecnologias reprodutivas como a criopreservação seminal. Palavras-chave: Caprino. Extrato de bromelina. Criopreservação. Sêmen. |
| Abstract | Goat farming has an important socio-economic role in the Northeast region of Brazil, as almost all of the goat herd is located in this region. This activity contributes to income generation and a source of affordable protein for subsistence agriculture. Given the relevance of this activity, the objective was to evaluate the effect of bromelain on sperm quality, post-thawing, in goats. For this purpose, five Anglo Nubian goats of reproductive age and clinically healthy were used. Semen collection was performed with the aid of an artificial vagina specific for small ruminants, pre-heated to a temperature of 39ºC, coupled to a graduated collection tube. After collection, the semen was placed in a water bath at a temperature of 37ºC. Immediately, sperm analysis was performed. Following the analysis of sperm concentration, the total pool volume was divided into five groups. One belonging to the control group, which was composed of (ACP-101/102®) and the other four groups, treatments with ACP-101/102® added with bromelain at 5% concentrations; 10%; 15% and 20%. The samples were cryopreserved using the Tk3000® device (TK Tecnologia em Congelação LTDA, Uberaba, Brazil), following the manufacturer`s instructions. Later, the straws were immersed in liquid nitrogen (-196°C) and stored in cryogenic cylinders. After a minimum period of one week, the samples were thawed and evaluated using the CASA system (Computer Assisted Sperm Analysis). Subsequently, thermoresistance tests, fluorescent probes to assess membrane and acrosome integrity, comet test to assess sperm DNA integrity and ultrastructural analysis of sperm using transmission electron microscopy were performed. After thawing, total sperm motility assessed by the CASA system was better preserved in the control group and in the experimental group using the 5% concentration compared to using the highest concentration (20%). The curvilinear velocity and mean trajectory velocity of sperm were higher in the control group compared to the others. Among the groups using bromelain, lower velocities were verified in the sperm of the group using 20% of this component. Regarding DNA integrity, the respective concentrations of bromelain (5%, 10%, 15% and 20%) did not show significant difference compared to the control group, thus it is visible that bromelain does not present genotoxicity to goat sperm. The ultrastructural analysis revealed that the group containing 5% of Bromelain showed intermediate preservation, presenting well-preserved cells at the level of the intermediate piece and tail, and in the group containing 10%, low cell preservation was observed, demonstrating that bromelain in this concentration can have harmful effects on sperm. Therefore, the use of Bromelain added to the goat semen extender/cryoprotector proved to be satisfactory in the seminal parameters after thawing. However, more studies are needed in order to improve and validate the use of bromelain in reproductive technologies such as seminal cryopreservation. Keywords: Goat. Bromelain extract. Cryopreservation. Semen. |
